萱草組織培育及植株再生的研究
摘要：目的：研究藥用植物萱草的組織培育技術(shù)。為工廠育苗提供科學(xué)依據(jù)。方式：以萱草的幼嫩花梗為外植體，采取MS培育基，附加不同的植物激素舉行實(shí)驗(yàn)。效果：愈傷組織誘導(dǎo)的較佳培育基配方是MS+6-BA1.0mg?L+NAA0.1 mg?L，不定芽誘導(dǎo)的較佳培育基配方是MS+6-BA1.0 mg?L+NAA0.1 mg?L，不定根誘導(dǎo)的較佳培育基配方是1/2MS+IBA0.1 mg?L+NAA0.1 mg?L。結(jié)9k：以幼嫩花梗為外植體。通過誘導(dǎo)愈傷組織途徑可以到達(dá)快速繁殖的目的。 下午詞：萱草；組織培育；植株再生 中圖分類號(hào)：R285.5
文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1673-7717(2007)12-2552-02
萱草Hemerocallis fulva L.系百合科(Liliaeea)多年生草本植物，以根及根莖入藥，為我國傳統(tǒng)中藥“萱草根(Ra-dix Hemerocallis)”，具有清熱涼血、利尿通淋的成果，用于治療水腫、小便晦氣、淋濁、帶下、黃痘、便血、崩漏等癥。近年來研究注釋萱草根中含有多種蒽醌類和二氫呋喃-γ-內(nèi)酰銨類化合物，這些身分具有抗菌、抗癌、殺蟲等生物活性。 萱草不僅具有藥用價(jià)值，還具有蔬菜食用和花卉觀賞價(jià)值。其花經(jīng)過加工后是頗負(fù)盛名的“黃花菜”、“金針菜”，營養(yǎng)豐富，且具有保健益壽之功。而其觀賞價(jià)值體現(xiàn)在萱草花秀美俊俏、雅而不俗、人見人愛，令人歡喜，解憂忘愁，是“中國的母親花”、“忘憂草”。以往報(bào)道的萱草組織培育的文章，是基于觀賞花卉品種的快速繁殖技術(shù)的實(shí)驗(yàn)研究，而在藥用和食用方面缺乏思索和實(shí)踐。因此，作者借鑒這些研究成果，對(duì)藥用植物萱草開展了組織培育技術(shù)方眼前期實(shí)驗(yàn)工作，期望為進(jìn)一步研究其藥材質(zhì)量以及開發(fā)中藥成果保健類蔬菜奠基基礎(chǔ)。
1.質(zhì)料與方式
1.1質(zhì)料 供試植物質(zhì)料采自北方國家級(jí)林木種苗樹模基地栽植的生長結(jié)實(shí)、無病蟲害的帶花萱草植株，經(jīng)首都醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院中藥資本學(xué)教研室劉長利博士判斷為H.fulva，外植體為萱草的幼嫩花梗。
1.2方式 ①無菌外植體的得到：將外植體先用毛刷蘸洗滌劑洗凈，再用流水沖洗清潔。在無菌條件下用75％的酒精消毒30s，再用0.1％的HgCl溶液浸泡5min，較后用無菌水沖洗6～8次，在無菌條件下切成1～1.5cm長的小段舉行接種。②培育條件：培育條件為MS培育基，附加0.6％瓊脂，pH5.8。培育室溫度為(25±2℃，光照12h?d，光照度為20001x。
2.效果與分解
2.1激素對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)的影響 將萱草幼嫩花梗劃分接種于含有不同激素配比的1～6號(hào)培育基(蔗糖濃度為3％)中。培育30天后統(tǒng)計(jì)各處理愈傷組織誘導(dǎo)情況。效果見表1和圖1。

由表1可以看出，植物激素濃度越高越容易誘導(dǎo)出愈傷組織，但當(dāng)細(xì)胞盤據(jù)素與生長素濃度到達(dá)1：0.05時(shí)，愈傷組織色淺不易分化芽，而且玻璃化嚴(yán)重；當(dāng)細(xì)胞盤據(jù)素與生長素比例小時(shí)，愈傷組織分化率也降低，試驗(yàn)效果注釋誘導(dǎo)愈傷組織的較佳培育基配方是MS+6-BA1.0 mg?L+NAA0.1mg?L，所誘導(dǎo)出的愈傷組織黃綠色，且外面有突起的芽點(diǎn)。
2.2激素對(duì)不定芽分化與繼代增殖的影響 將誘導(dǎo)出的愈傷組織轉(zhuǎn)接到含有不同激素配比的4～7號(hào)培育基(蔗糖濃度為3％)中，培育1個(gè)周期后觀測(cè)其生長情況，效果見表2和圖2。

由表2可見，細(xì)胞盤據(jù)素6～BA濃度在0～1.0mg?L之間均能誘導(dǎo)出不定芽(圖2所示)，隨著其濃度的增高，誘導(dǎo)出的芽數(shù)增添，苗子相應(yīng)變細(xì)弱。研究效果注釋：隨著繼代次數(shù)的增添，較高濃度的細(xì)胞盤據(jù)素6-BA，容易引起玻璃化，苗子不結(jié)實(shí)。在生產(chǎn)歷程中隨著繼代次數(shù)的增添應(yīng)逐步降低細(xì)胞盤據(jù)素的濃度，直至為零。
2.3激素對(duì)不定根誘導(dǎo)培育的影響 經(jīng)過一段時(shí)間的繼代培育后，將叢生芽切分成帶小量愈傷的單株轉(zhuǎn)到含有不同激素配比的8～10號(hào)培育基(蔗糖濃度為2％)中。半月后觀測(cè)其生根情況，效果見表3和圖3。

由表3可見，萱草組培苗生根較容易。實(shí)驗(yàn)效果注釋：誘導(dǎo)不定根培育的較佳培育基配方是1/2MS+NAA0.1mg?L+IBA1.0mg?L。經(jīng)過8～10天后開始長出乳白色星狀根(如圖3所示)，至15天時(shí)，生根率較高可達(dá)99.5％。
2.4組培苗的移栽 當(dāng)組培苗根長至1cm時(shí)，將培育瓶放在自然光照下煉苗3～5天后，打開瓶蓋再煉苗3～5天，輕輕取出組培苗，洗凈培育基后，移栽到經(jīng)0.1％KMnO溶液消毒過的基質(zhì)中，保持一定的溫度和濕度，馴化成活率可達(dá)95％以上，2周后待長出新葉即可移栽到苗圃，移栽成活率可達(dá)100％。
3.討論
萱草一般采取分蘗方式舉行增殖，1株萱草每年僅可繁殖4～5株，難以適應(yīng)市場(chǎng)商品化生產(chǎn)的要求。本文通過對(duì)萱草的組織培育和植株再生的實(shí)驗(yàn)研究，成立了以萱草幼嫩花梗為外植體、誘導(dǎo)愈傷組織、不定芽分化、生根培育及煉苗移栽的技術(shù)系統(tǒng)，該技術(shù)取材容易，消毒簡(jiǎn)捷，移栽成活率高，是加速繁殖速度的有用途徑，為工廠化育苗提供了科學(xué)的實(shí)驗(yàn)依據(jù)，為進(jìn)一步研究其藥用身分含量、開發(fā)中藥成果保健類蔬菜奠基了基礎(chǔ)。